设为首页  |   加入收藏  |   联系我们
产品目录
连华科技
锰法COD测定仪
实验室耗材
专业化配件
消解仪
浊度测定仪
悬浮物测定仪
重金属测定仪
水质污染物测定仪
土壤测定仪
总磷测定仪
总氮测定仪
BOD测定仪
氨氮测定仪
COD快速测定仪
多参数水质测定仪
上海棱光
选购附件
应力仪及雾度仪
近红外分光光度计
可见分光光度计
紫外可见分光光度计
荧光分光光度计
滴定仪
杭州启鲲
总有机碳分析仪
其他
德国珊贝克
工作站
兰化所
二手仪器
二手前处理设备
二手离子色谱
二手ICP-MS
二手ICP
二手原子吸收光谱仪
二手液质联用仪
二手气质联用仪
二手示差
二手荧光
二手液相色谱仪
二手气相色谱仪
热电柱子
上海安亭科学
上海安亭电子
三用紫外分析仪
电子天平
浊度计
水分测定仪
滴定仪
上海纤检
固相萃取
近红外光谱(NIR)
定氮仪、凯氏定氮仪、Dumas定氮仪
电热消解仪、消化炉
二氧化硫检测仪
啤酒分析仪、饮料分析仪
真菌毒素测定仪(黄曲霉毒素)
纤维测定仪、纤维素测定仪、纤维分析仪
其它行业专用
冷水机、冷却循环水机
抽提萃取、索氏提取、脂肪测定仪
酶标仪
滴定器
岛津耗材
大连依利特
Hypersil BDS填料
SinoChrom系列
SinoPak填料
Supersil填料
G-10系列
Hypersil系列
上海申安
昭和
上海亚荣
上海菁海
上海菁华
上海精宏
上海一恒
高温鼓风干燥箱
精密鼓风干燥箱
鼓风干燥箱
上海博迅
电阻炉
振荡器摇瓶机
水浴和油槽
真空干燥箱
热空气消毒箱
精密可程式烘箱
鼓风干燥箱
隔水式培养箱
微生物培养箱
电热恒温培养箱
二氧化碳培养箱
摇床培养箱
人工气候箱
光照培养箱
恒温恒湿箱
振荡培养箱
霉菌培养箱
生化培养箱
稳定性试验箱
可扩展试验箱
生物安全柜
净化工作台
卧式蒸汽压力灭菌器
新款立式压力蒸汽灭菌器
压力蒸汽灭菌器
上海元析
原子吸收分光光度计
火焰光度计
微波消解仪
TOC分析仪
光度计附件
生物分光光度计
紫外可见分光光度计
岛津天平
上海精科天美天平厂
普利赛斯水分仪
普利赛斯粘度计
普利赛斯天平
水分仪
天平
粘度计
上海仪电物光厂
仪器配件
其他仪器
浊度计
测色仪
应力仪
阿贝折射仪
熔点仪
激光粒度仪
旋光仪
上海仪电分析仪器厂
农药残毒速测仪
荧光系列
火焰光度计
液相色谱仪
气相色谱仪
原子吸收分光光度计
紫外可见分光光度计
可见分光光度计
上海仪电雷磁厂
试剂及配件
电化学传感器
在线溶解氧监测仪
在线电导率检测仪
在线PH检测仪
在线自动分析系统
在线高锰酸盐指数自动检测仪
在线COD监测仪
在线总磷自动检测仪
在线总氮自动检测仪
在线氨氮自动监测仪
在线多参数水质检测仪
COD测定仪
浊度计
水质分析仪
卡尔费休水份仪
滴定仪
多参数分析仪
溶解氧测定仪
离子计
电导率仪
PH计
上海昌吉
北京踏实
活化仪
吹扫捕集
热解析仪
上海光谱
可见、紫外分光
原子吸收
尤尼科
上海美普达
上海科哲
喷雾器
展开仪
铺板机
点样仪
成像系统
扫描仪
上海伍丰
联系我们
  • 地址:山东省济南市
  • 电话:18363067983
  • 传真:
  • 手机:18363067983
  • 联系人:王女士
  • 网址:
  • 邮箱:1702706974@qq.com
你当前的位置:技术文章

你知道高效液相色谱检测氨基酸的方法吗
阅读次数:306  发布时间:2020/5/27 14:46:27

 

你知道高效液相色谱检测氨基酸的方法吗

 Wayeal 皖仪科技应用开发中心 1周前
 

 




氨 基 酸


    
是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物,羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后形成的化合物。氨基酸分子中含有氨基和羧基两种官能团。与羟基酸类似,氨基酸可按照氨基连在碳链上的不同位置而分为α-,β-,γ-...w-氨基酸,但经蛋白质水解后得到的氨基酸都是α-氨基酸,而且仅有二十几种,他们是构成蛋白质的基本单位。

氨基酸的检测方法较多:分光光度法、气相色谱法、液相色谱法(包括氨基酸分析仪)、毛细管电泳法、化学发光法、荧光光谱法等。


今天我们介绍的是分析实验室较常用的方法
高效液相色谱法

 

柱前衍生法的一种

紫外-可见光检测器检测

17种氨基酸

 

一、前处理(衍生)

 

1.1 标准品的衍生
衍生剂稀释为原浓度1/5:分别移取2ml 的衍生试剂AB于两支10mL 的棕色容量瓶中,用稀释剂分别将其稀释至刻度;精密量取上述对照品溶液0.5mL,置于试管中,加入稀释后的A溶液和稀释后的B溶液各0.25mL,摇匀。室温下反应60min,取出后加入正己烷0.5mL,振摇;放置 30 分钟后取澄清的下层溶液进样分析。

 

1.2 样品的处理与衍生
(此处以饲料样品为例)
称取一定量的饲料样品,称样量根据氨基酸的含量确定(将氨基酸总量控制在10~25mg),置于水解管中。向水解管中精确加入酸水解液10mL,摇匀后放入冰箱冷冻。取出冷冻的水解管,向其中通入氮气并迅速封盖。将水解管置于110 摄氏度恒温箱中水解24 小时。水解完毕后取出水解液冷却至室温,将水解液倒入100mL 容量瓶中,用适量的纯水清洗水解管合并至容量瓶中,纯水定容至刻度。


0.5mL 的水解样品于试管中,用氮气吹干后再用 0.1mol/L 盐酸溶液0.5mL溶解,如有必要可重复此过程一次。
吸取 0.5mL 上述水解液,用1.1的方法衍生

 

二、色谱条件

 

色谱柱:氨基酸专用分析柱

流动相:

流动相 A0.1mol/L 乙酸钠溶液(pH6.5):乙腈=93:7

流动相 B→水-乙腈=20-80
梯度表如下:

 

  长:254nm
进样量:2μl
  温:40℃
  量:1.0mL/min

 

三、标准品谱图

 

1-门冬氨酸、2-谷氨酸、3-丝氨酸、4-甘氨酸、5-组氨酸、6-精氨酸、7-苏氨酸、 8-丙氨酸、9-脯氨酸、10-氯化铵 11-酪氨酸、12-缬氨酸、13-蛋氨酸、14-胱氨酸、15-异亮氨酸、16-亮氨酸、17-苯丙氨酸、18-赖氨酸


 

图2:氨基酸混合标准品-放置较长时间

 

四、样品谱图

 

某饲料

盐酸赖氨酸盐

 

注意

 

 酸水解的过程中,色氨酸被完全破坏;丝氨酸和苏氨酸被部分破坏;蛋氨酸可能会被氧化;半胱氨酸全部转化为胱氨酸,但是胱氨酸的的回收率通常非常小。

 氨基酸的链接顺序对水解也有很大的影响,由于脂肪性氨基酸的疏水端阻碍水解,因此脂肪性氨基酸之间的肽键较难断开,如异亮氨酸-异亮氨酸,缬氨酸-缬氨酸,异亮氨酸-缬氨酸等肽键在110℃加热24 小时,只能断开50%70%

 如果样品存在挥发性盐类和洗涤剂,都会使结果受到影响,尤其对门冬氨酸、谷氨酸、

组氨酸和赖氨酸的影响*。

 在水解液氮吹的过程中,如果使用的是普通的氮吹仪,要防止水解液喷溅到金属导气针上,否则含有盐酸的水解液会将导气针上的亚铁离子带入到试管中,污染水解液。被污染的水解液吹干后用水溶解呈现淡淡的黄绿色,且加入衍生试剂后会形成棕褐色絮状悬浮物。


氨基酸检测

相关产品

 

 

 

原创作者:济南扬文商贸有限公司

相关产品

济南扬文商贸有限公司主营:仪器仪表,实验室分析设备,实验室耗材,电子产品,环保设备,化工产品(不含危险化学品,易制)

公司名称:济南扬文商贸有限公司 公司地址:山东省济南市 邮政编码: 邮箱:1702706974@qq.com
联系人:王女士 联系电话:18363067983 技术支持:阿仪网 总访问量:333940
阿仪网推荐收藏该企业网站